【作者】 陈玉；

【导师】 陈志武； 王升启；

【作者基本信息】 安徽医科大学 ， 药理学， 2011， 硕士

【摘要】 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)属嗜肝DNA病毒科,是已知感染人类的最小DNA病毒。HBV感染不仅可以引起急、慢性肝炎,而且还与肝硬化、肝癌的发生、发展密切相关。根据文献报道,乙肝病毒表面抗原所含LS蛋白是导致肝细胞损伤、死亡和纤维化病变的主要原因。一些宿主蛋白与LS有相互作用,能够抑制乙肝病毒的感染、复制。PLSCR1(磷脂爬行酶1,phospholipid scramblase 1)属于Ca2+结合的棕榈化Ⅱ型膜蛋白,非棕榈化的PLSCR1蛋白可定位于细胞核内,并与基因组DNA序列结合。PLSCR1蛋白广泛分布于细胞膜与细胞核中,参与了细胞的分化增殖,并且与信号的转导有关联。最初文献报道该蛋白有抗白血病作用[25]。在本实验前期工作中,通过应用Far-westen-2D结合质谱鉴定技术,从正常人肝细胞中筛选乙肝表面抗原相互作用蛋白,共获得了15个候选蛋白分子。磷脂爬行酶1(Phospholipid scramblase 1,PLSCR1)为上述实验筛选出的一个蛋白分子,与乙型肝炎病毒表面抗原(surface HBV antigens, HBsAg)有相互作用,继而通过酵母双杂交技术验证其有体外抑制HBV的作用。本论文通过构建PLSCR1的分段真核表达载体,并和带有myc抗体标签的乙肝病毒打蛋白(LS蛋白)共表达于细胞中,采用免疫共沉淀实验筛选PLSCR1和HBsAg有效结构域。另外,通过酶联免疫吸附实验(enzyme linked immuno-sorbent assay,ELISA)验证了PLSCR1各片段对HBsAg的抑制作用。结果显示,部分PLSCR1片段对HBV的抑制作用比PLSCR1全长更显著,部分片段表现为促进宿主细胞中HBsAg的表达。其中1-118aa、81-118aa、61-118aa、31-118aa位置片段有抑制乙肝病毒HBsAg的作用;1-80aa、1-60aa、1-30aa片段有促进HBsAg分泌的作用。综上所述,本研究选取人体组织中和HBsAg具有相互作用的蛋白PLSCR1,并筛选了PLSCR1与HBsAg的有效结构域,为抗乙肝的靶标药物提供候选靶标;同时,筛选出的对HBV中HBsAg的表达表现为促进作用的片段,可以为建立新的研究乙肝的细胞模型提供基础。更多还原

【Abstract】 Hepatitis B virus (HBV), the prototype for the family Hepadnaviridae, is known as the smallest DNA virus that infects human beings. HBV infection causes acute and chronic necroinflammatory liver disease. Infected individuals are at high risk of developing liver cirrhosis and eventually, hepatocellular carcinoma.LS was the main reason on damage ,die and dissolve of hepatocyte. The HBV infection and replication can be inhibited by some host Protein-LS interaction .Phospholipid scramblase 1 (PLSCR1) is a calcium-binding, multiply palmitoylated type II endofacial plasma membrane protein, while unpalmitoylated PLSCR1 protein can import into the nucleus, where it binds to genomic DNA. Although the original work showed that PLSCR1 contributes to the transbilayer movement of phospholipids.In summary, we reached the interaction between PLSCR1 and LS, and studied its biological significance in the process. Preliminary findings of this study, exogenous PLSCR1 inhibits secretion of HBsAg, after sub-expression, we found that the inhibition of some fragments of PLSCR1 on HBsAg was more significant than the full-length. The results may provide further evidence for potential roles of PLSCR1 ,and for the possibility of PLSCR1 as a new potential target for anti-HBV drugs.更多还原