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鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF72基因克隆、蛋白原核表达和抗体制备

Cloning,protein prokaryotic expression and antibody preparation ofORF72gene in cyprinid herpesvirus

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【作者】 李双； 向涛； 周海峰； 吴霆； 顾伟； 王文； 孟庆国；

【Author】 Li Shuang;

【通讯作者】 孟庆国;

【机构】 南京师范大学生命科学学院/江苏省水生甲壳动物病害重点实验室； 江苏省宝应县水生动物疫病预防控制中心；

【摘要】 异育银鲫作为我国重要的淡水经济鱼类,其鳃出血病为主要病害,并造成重大经济损失,该病病原为鲤疱疹病毒Ⅱ型(cyprinid herpesvirusⅡ,CyHV-2)。目前,研究主要在该病的检测和病理方面,对于免疫学检测方面研究较少。本研究根据CyHV-2 ORF72基因序列设计了1对特异性引物,利用患病异育银鲫肾脏DNA作为模板,通过PCR扩增得到CyHV-2 ORF72基因全长,该基因序列全长为1 113 bp,可编码370个氨基酸的蛋白。该基因与pET-28a表达载体连接构建重组原核表达载体pET-ORF72转入大肠杆菌中,经IPTG诱导表达得到了分子量约为45 ku的重组蛋白,与预测的蛋白大小基本一致。将纯化的重组蛋白皮下多点注射免疫新西兰大耳兔制备了ORF72的多克隆抗体,经Western Blotting检测抗体能与病毒粗提液有良好反应,特异性较好,本结果可为下一步建立疫苗和免疫检测方法奠定基础。

【关键词】 异育银鲫； 鲤疱疹病毒Ⅱ型； ORF72； 多克隆抗体； Western Blotting；
【基金】 渔业重大技术集成与示范推广项目(编号:D2015-13-5)
  • 【文献出处】 江苏农业科学 ,Jiangsu Agricultural Sciences , 编辑部邮箱 ,2019年14期
  • 【分类号】S943
  • 【网络出版时间】2019-07-29 07:12
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】263
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