【作者】 曹燕然；

【导师】 邵宗鸿；

【作者基本信息】 中国协和医科大学 ， 内科学， 2004， 博士

【摘要】 【研究背景】 阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是由体细胞X-染色体连锁,PIG-A基因突变导致的一种获得性血液学紊乱。最根本的特征是葡萄糖磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白(GPI-APs)缺失或减少的造血干细胞克隆扩增，临床主要表现为溶血性贫血、血栓形成和造血功能障碍。 虽然发现PIG-A基因突变及其导致的一系列生化和分子机制异常已能较好地解释PNH部分临床表现，但还不足以说明PNH突变干细胞如何取代正常造血而获得在骨髓继而在外周血中的优势。目前，对于PNH细胞克隆主宰造血的机制有几种解释：1．与正常的造血干／祖细胞相比，缺乏GPI-APs的细胞可能存在内源性增殖优势进而使正常表型的细胞逐渐减少，这是解释体细胞PIG-A突变后发展为PNH的最简单的模型。但是，目前体外培养及对PIG-A基因敲除小鼠胚胎和小鼠嵌合体模型的研究结果不支持这种可能性。2．凋亡的减少也被提出为GPI阴性细胞持续存在及占据优势的原因。迄今为止对于突变的PNH细胞能否抵抗凋亡的研究结果尚不一致。3．环境因素施加的直接或间接的选择压力使PIG-A基因突变的细胞系得以扩增，即生存优势。另外，由于PNH与MDS和急性白血病的发生有关，有人假设PNH为白血病的多步发展过程中的一步，也有人假设AML与PNH更象是从某种相似因素影响下的背景各自发展而来的。Bessler认为还存在另一种过程能一过性的增加体细胞突变率(包括PIG-A基因突变)以减轻早期骨髓衰竭带来的选择压力。 PNH的常规治疗手段有：肾上腺皮质激素、雄激素、免疫抑制剂、抗凝治疗、以及红细胞输入等支持治疗。肾上腺皮质激素至今仍是治疗PNH的一种主要药物，但对激素无效或依赖的难治性／复发性PNH如何治疗，一直是棘手的难题。免疫抑制治疗对骨髓低增生PNH患者疗效较好，而对典型血红蛋白尿发作的PNH患者疗效欠佳。传统治疗有效的患者也易复发，而且治疗有效后，溶血指标并没有明显改善。造血干细胞移植术(SCT)是可能根治PNH的方法，但PNH是一个慢性的良性疾病，SCT10％～20％的相关死亡使其仅限于那些难治性、耐皮质激素或有激素禁忌症的患者。早在70年代末，苏联学者就报道环磷酰胺(CTX)或6-巯基嘌呤治疗PNH取得一定疗效。我们设计过几种化疗方案，也取得一定疗效，但仍不理想。国外还有使用G-CSF治疗PNH和刺激正常造血的报道。更多还原

【Abstract】 OBJECTTIVES:1 .To observe the efficacy and side effects of DA/HA chemotherapy on refractoryand relapsed paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH).2.To compare the growth and the response of PNH and normal controls’ bonemarrow mononuclear cells (BMMNCs) to the granulocyte colony-stimulatingfactor (G-CSF) in vitro.3.To study the expression of G-CSF receptor (G-CSFR)(CD114) and stem cellfactor (SCF) receptor (SCFR)(CD117) on BMMNCs of PNH patients and normalcontrols.4.To analyze normal and PNH patients’ bone marrow (BM) neutrophils forCD16b, apoptotic receptor Fas (CD95) and apoptosis related proteins Bcl-2 andBax.METHOD:1.Clinical trial:8 patients with refractory and relapsed PNH were treated with DA/HA chemotherapy. The regimens were as following: 3 patients were treated with DA (DNR40 mg/d, i. v. drip, the first and the second day; 20mg/d, i. v. drip, the third day; Ara-C 100mg/d, i. v. drip, for 5 days), 5 patients were treated with HA (HHT 2mg/d~3mg/d, i.v.drip, for 5 days; Ara-C 100mg/d, i.v.drip, for 5 days). The therapeutic effects were observed.2.In vitro culture:BMMNCs from17 PNH patients and 12 normal controls were inoculated into semisolid culture, divided into two groups: one growed with G-CSF (50ng/ml), the other without. Then the cluster/colony forming unit-granulocyte/monocyte (CFU/cFU-GM) were observed and the effect of G-CSF were compared.3.Mechanism investigation:(1)BMMNCs of 20 PNH patients and 12 normal controls were triple stained for更多还原