【作者】 周飞；

【导师】 江家骥； 林旭；

【作者基本信息】 福建医科大学 ， 内科学， 2011， 博士

【摘要】 目的:分子流行病学方法检测肝癌患者中HBV病毒株MHBst的种类,并研究各种MHBst的反式激活能力及对细胞的增殖、成瘤和凋亡影响。以免疫沉淀的方法筛选MHBst167候选结合蛋白。探讨截短中蛋白在肝细胞内的可能存在的分子作用机制。方法:应用多聚酶链反应(PCR)和Alu-PCR技术自HBV感染肝癌患者外周血和肝癌组织中扩增S基因序列,并进行pMD18-T载体的TA克隆,随机选择部分克隆进行DNA测序并对测序结果进行生物信息学分析。应用GeneTailor Site-Directed Mutagenesis System突变S蛋白的起始密码子,将S基因点突变成功的不同MHBst构建真核表达载体和腺病毒表达载体,转染或感染细胞后Western-blot验证其蛋白的表达。通过启动子激活萤火虫萤光素酶的表达研究不同MHBst反式激活功能。通过CCK-8、软琼脂克隆形成及TUNEL方法观察不同截短型的中蛋白对细胞增殖、成瘤及凋亡功能的影响。以免疫沉淀的方法筛选出MHBst167结合蛋白。结果:成功自80例HBV感染肝癌患者的血清中获得700多个S基因的阳性克隆,通过测序获得600条S区基因序列... 更多还原

【Abstract】 OBJECTIVE:To study the types of MHBst in hepatocellular carcinoma patiens and MHBst biologic funcation in hepatocytes.METHODS:The S region of HBV was amplified by polymerase chain reaction (PCR) method from 80 cases of hepatocellular carcinoma, and the PCR products were cloned into pMD18-T vector and sequenced. Vector 10.0 software was emploied to analyze the sequences. Alu-polymerase chain reaction approach to detcet the HBV DNA integration into cellular genes. The PCR products were cloned into... 更多还原