【作者】 盛慧；

【导师】 刘义；

【作者基本信息】 华中科技大学 ， 妇产科， 2007， 硕士

【摘要】 目的:近年来通过对多囊卵巢综合征(PCOS)患者胰岛素作用的经典组织—脂肪组织和生殖功能单位—卵巢组织的研究表明,胰岛素受体底物(Insulin receptor substrate IRS)-1和IRS-2作为胰岛素受体的主要的船坞蛋白,其蛋白表达和酪氨酸磷酸化异常是引起PCOS胰岛素抵抗(IR)的主要原因。但对PCOS患者另一个重要的生殖功能单位—子宫内膜是否也存在胰岛素抵抗目前尚未见报道。为了进一步探讨胰岛素抵抗在PCOS发病中的作用,本文通过对PCOS患者子宫内膜IRS-1和IRS-2的蛋白表达及酪氨酸磷酸化程度进行了研究,旨在明确PCOS患者子宫内膜是否存在胰岛素抵抗,探讨PCOS患者子宫内膜胰岛素抵抗的分子机制。讨论子宫内膜胰岛素抵抗对PCOS患者不孕、高流产率及子宫内膜癌的影响。方法:选择2005年9月至2006年6月在华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科诊断为PCOS合并IR患者15例,平均年龄29±4岁。另外选择月经周期规则,血清性激素、空腹血糖及胰岛素检查正常妇女10例作为对照组,平均年龄28±3岁,与PCOS合并IR组年龄相匹配。两组均除外肾上腺、甲状腺等疾患,3个月内未服用过激素类药物,无心、肝、肾疾病史。所有受试者均于月经第一天,行诊断性刮宫术,术中留取子宫内膜组织,37℃生理盐水冲洗血液。分两组,一组用4%的甲醛固定,石蜡包埋。切片厚度为3-4um,每例均做三张切片,用于免疫组织化学染色。另一组置于-80℃低温箱保存,用于免疫印记及免疫沉淀法。采用免疫组化方法和蛋白印记(western blot)、免疫沉淀技术检测两组子宫内膜IRS-1和IRS-2的蛋白表达及酪氨酸磷酸化程度。结果:⑴免疫组化结果显示,IRS-1、IRS-2主要表达在子宫内膜的腺上皮的胞浆中,呈黄色颗粒状。PCOS合并IR组和对照组IRS-1、IRS-2蛋白表达的灰度值分别为121.94±16,169.35±13和55.35±0.98,111.65±8.02,两组比较差异有显著性(P<0.01,P<0.05);PCOS合并IR组子宫内膜酪氨酸磷酸化程度明显低于对照组,其灰度值分别为141.98±22.5,102±9.78,两组比较差异有显著性(P<0.05)。⑵蛋白印记分析结果显示,PCOS合并IR组和对照组IRS-1、IRS-2蛋白表达分别为1.4±0.62,6.1±0.23和4.2±0.38,9.1±8.4,两组比较差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。⑶免疫沉淀结果显示,PCOS合并IR组和对照组IRS-1、IRS-2蛋白酪氨酸磷酸化程度分别为1.6±0.64,1.4±0.42和1.5±0.23,3.4±0.47,两组比较差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。结论:⑴免疫组化结果显示,IRS-1、IRS-2主要表达在子宫内膜的腺上皮的胞浆中,呈黄色颗粒状。PCOS合并IR组IRS-1、IRS-2蛋白表达的灰度值高于对照组,表明PCOS合并IR患者子宫内膜IRS-1、IRS-2蛋白的表达明显降低。PCOS合并IR组子宫内膜酪氨酸磷酸化程度明显低于对照组,表明PCOS合并IR组子宫内膜酪氨酸磷酸化程度明显减弱。⑵蛋白印记分析结果显示,PCOS合并IR组IRS-1、IRS-2蛋白表达明显低于对照组。⑶免疫沉淀结果显示,PCOS合并IR组IRS-1、IRS-2蛋白酪氨酸磷酸化程度低于对照组。⑷PCOS合并IR患者子宫内膜IRS-1、IRS-2蛋白的表达及酪氨酸磷酸化程度降低导致受体后信号转导障碍,可能是子宫内膜发生胰岛素抵抗(IR)机制之一。更多还原

【Abstract】 OBJECTIVE: To explore molecular mechanisms of insulin resistance of polycystic ovary sndrome (PCOS) by determining the tyrosine phosphorylation and protein expression of insulin receptor substrate1 and 2 (IRS-1, IRS-2) in endometrium from patients with PCOSMETHODS: The endometrium samples from patients with PCOS with insulin resistance﹝n=15﹞controls﹝n=10﹞were collected. The expression of insulin receptor substrate-1and 2 and tyrosine phosphokinase were analyzed by immunohistochemistry, western blot and immunoprecipitation. The gray degree of sections was determined by image analysis system. The ray density was scan by gelatin image analysis system.RESULT:﹝1﹞The gray degree of IRS-1/2 expression﹝121.94±16,169.35±13﹞in endometrium in PCOS with insulin resistance were significantly higher than than those in controls﹝55.35±0.98,111.65±8.02﹞﹝P<0.01,P<0.05﹞, indicating that the expression of IRS-1and 2 were decreased in endometrium in PCOS with insulin resistance .The gray degree of tyrosine phosphorylation of IRS﹝141.98±22.5﹞in endometrium in PCOS with insulin resistance were significantly higher than those in controls﹝102.72±9.78﹞﹝P<0.05﹞, indicating that the expression of tyrosine phosphorylation was also decreased in endometrium in PCOS with insulin resistance.﹝2﹞The protein expression of IRS-1 and 2 in PCOS with insulin resistance(4.2±0.38 and 1.4±0.62)were significantly lower than those in control group(9.1±8.4 and 6.1±0.23),(P<0.01,P<0.01﹞.﹝3﹞tyrosine phosphorylation of IRS-1 and IRS-2 in PCOS group with insulin resistance( 1.6±0.64 and 1.5±0.23)were significantly lower than those in control group(1.4±0.42 and 3.4±0.47),(P<0.05,P<0.01﹞CONCLUSION: The signal transduction malfunction because of protein expression and tyrosine phosphorylation of IRS in endometrium may be one of mechanism leading to insulin resistance in endometrium from patients with PCOS.更多还原