【作者】 王丽华；

【导师】 赵砚丽； 赵鹤龄；

【作者基本信息】 河北医科大学 ， 麻醉学， 2004， 硕士

【摘要】 目 的：通过观察红细胞超微形态和检测红细胞C3b受体花环形成率（RBC-C3bRR）、红细胞免疫复合物花环形成率（RBC-ICR）、表达CD35阳性的红细胞百分率、红细胞超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）含量，探讨术中回收式自体输血（intraoperative autotransfusion,IAT）和血液保存对红细胞超微形态和免疫功能的影响。方 法：随机选取预计术中出血量在600mL以上的手术患者50例，年龄(25～69)岁，体重（35～82）kg，ASA I-III级，肾功能正常，无血液疾病、自身免疫性疾病及内分泌疾病，近期未进行过放疗、化疗及应用免疫抑制剂。选用静吸复合全麻，以芬太尼、依托咪酯和琥珀胆碱快速诱导气管插管，术中用芬太尼、异丙酚、维库溴铵和异氟醚维持麻醉。术中出血采用ZITI-2000型血液回收机（北京京精医疗有限公司）进行IAT。抽取50例IAT回收浓缩红细胞各1mL为I组；抽取50例患者术野血各2mL，离心后取红细胞为II组；抽取50例用枸橼酸-磷酸-葡萄糖-腺嘌呤（CPDA）保养液保存两周的库存浓缩红细胞各1mL为III组。样本经2.5%戊二醛固定、双蒸水清洗、乙醇梯度脱水、叔丁醇干燥、离子金属镀膜，用日立HITACHI S-3500型扫描电子显微镜观察红细胞，随机选取5个细胞疏密程度适中的放大1000-3000倍的视野存储图像。统计各视野双凹圆盘<WP=4>形红细胞(discocyte)、棘形红细胞(echinocyte)和口形红细胞(stomatocyte)的百分率。将补体致敏酵母菌和补体未致敏酵母菌试剂按红细胞计数法配成1×108/mL备用。三组红细胞按红细胞计数法配成1.25×107/mL备用。测定方法：取两支试管，每管加红细胞悬液50μL，第一管加补体致敏酵母菌50μL，第二管加补体未致敏酵母菌50μL，混匀，37℃水浴30min，取出加0.25%戊二醛50μL固定，水平涂片瑞氏染色，在显微镜下计数200个红细胞，一个红细胞结合两个或以上酵母菌为一朵花环，计算百分率，第一管为RBC-C3b受体花环形成率（RBC-C3bRR，%），第二管为RBC-免疫复合物花环形成率（RBC-ICR，%）。取流式细胞仪专用管两支，第一管加入IgG1-FITC/IgG2-PE鼠抗人单克隆抗体5μL，第二管加入CD35-FITC单克隆抗体5μL，两管分别加入红细胞悬液5μL，前者为阴性对照。两管充分摇匀，置4℃冰箱15min，再加入生理盐水0.5mL，混匀后上