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毛白杨木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶PtoXTH35原核可溶性表达方法研究
Study on prokaryotic soluble expression method of xyloglucan endotransglycosylase/hydrolase Pto XTH35 in Populus tomentosa
【摘要】 从毛白杨中克隆得到木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶PtoXTH35基因,根据SignalIP在线软件预测蛋白信号肽,并分别构建至pET28a、pET32a、pGEX-4t-1、pMAL-c5e、pET 43.1a等5种原核表达载体,经双酶切和测序验证后转化至BL21(DE3)感受态,使用终浓度为0.4 mmol/L的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导其表达目的蛋白。经SDS-PAGE检测,结果表明5种载体均可表达目的蛋白,pET28a、pET32a、pGEX-4t-1等3种载体所表达蛋白均以包涵体的形式存在,而pMAL-c5e和pET 43.1a载体携带蛋白表达量高并且所表达蛋白50%为可溶性蛋白,实现了毛白杨PtoXTH35在原核表达系统中的高效可溶性表达,该试验为后续进一步研究毛白杨PtoXTH35的体外功能奠定了基础。
【关键词】 毛白杨；
木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶；
原核表达；
包涵体；
可溶性蛋白；
【基金】 国家自然科学基金(编号:31300498)
- 【文献出处】 江苏农业科学 ,Jiangsu Agricultural Sciences , 编辑部邮箱 ,2019年08期
- 【分类号】S792.117
- 【网络出版时间】2019-05-07 18:05
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