【作者】 高建鲁；

【导师】 吴欣怡；

【作者基本信息】 山东大学 ， 眼科学， 2006， 博士

【摘要】 第一部分： Toll样受体在人眼角膜上皮细胞的表达和功能研究 目的 探讨Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)1～TLR9在人眼角膜上皮及角膜上皮细胞系的表达及其功能。 材料和方法 用半定量RT-PCR方法检测20例健康青年人角膜上皮组织标本、永生化人眼角膜上皮细胞系(THCE)细胞及健康人外周血单个核细胞(PBMCs)的TLR1～TLR9 mRNA表达；免疫印记(Western blot)和免疫细胞化学方法检测人角膜上皮组织和角膜上皮细胞系THCE的TLR2和TLR4蛋白质表达及分布；用TLR3的配体聚肌胞苷酸(PolyI：C，1000g／ml)和TLR4的配体绿脓杆菌脂多糖(LPS，100ng／ml)刺激THCE细胞，于刺激后1h，2h，4h，8h分别收集细胞培养上清，用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其IL-8的变化。结合TLR4抗体封闭实验，研究TLRs在人眼角膜上皮细胞的表达及其功能。 结果 20例角膜上皮组织的RT-PCR结果显示：TLR1-TLR3，TLR5，TLR6及TLR9在人眼角膜上皮细胞为强表达，TLR7和TLR8弱表达，TLR4微弱表达。20例标本中1例TLR3，TLR4，TLR6及TLR8为阴性表达，1例TLR5微弱表达。THCE细胞与人眼角膜上皮组织有相似的TLRs表达谱；Western blot及免疫细胞化学结果显示人眼角膜上皮组织及THCE在蛋白质水平表达TLR2及TLR4；刺激实验显示LPS和PolyI：C刺激THCE后其培养上清中的IL-8浓度明显上升，8h时分别达到对照组的10倍(P＜0.05)和7倍(P＜0.05)。抗体封闭TLR4明更多还原

【Abstract】 Objective To investigate the expression and functionality of Toll-like receptor (TLR)1-TLR9 in human corneal epithelium and its cell line tolerated human corneal epithelial(THCE).Material and methods Expression of TLR1-TLR9 mRNA was determined by reverse- transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) analysis of 20 human corneal epithelial cells separated by photorefractive keratectomy (PRK), and THCE cell line. Human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were used as positive control. Expressions of TLR2 and TLR4 protein were detected with Western blot and immunocytochemistry. Functional relevance of TLR was tested by enzyme linked immunsorbent assay (ELISA) analysis of IL-8 production after stimulating cell lines with ligands for TLR3 or TLR4(Poly I:C or LPS). The effect of anti-TLR4 antibody on LPS-induced IL-8 production of THCE was observed.Results TLR1-TLR9 mRNA species were detected in both human corneal epithelial cells and THCE cells. Human corneal epithelium cells strongly express更多还原