【作者】 朱东亮；

【导师】 柴逸峰；

【作者基本信息】 第二军医大学 ， 药物分析学， 2012， 博士

【摘要】 针对中药复方物质基础研究的现状，选择了谱效学研究的思路和方法，选择中药复方六味地黄丸作为研究对象，在中医理论的指导下，进行中药化学成分指纹谱和生物效应谱相关性分析。建立以现代中医理论为指导、中药指纹图谱为核心、多指标成分定量分析为手段的中药的复方质量控制模式与评价方法，为中药复杂体系的分析提供方法学的集成创新。本课题采用HPLC-DAD-TOF/MS色谱联用技术，对六味地黄丸各种剂型进行了定性定量研究。首先通过建立六味地黄丸化学成分数据库，结合对照品比对和HPLC-IT/MS结构解析，对六味地黄丸的指纹图谱成分进行了鉴别，得到了明晰化的六味地黄丸指纹图谱，能够代表六味地黄丸中的多数色谱信息，为进一步谱效相关性的研究建立了基础。同时对六味地黄丸中6个指标性成分-没食子酸、5-羟甲基糠醛、马钱苷、獐牙菜苷、芍药苷和丹皮酚进行了含量测定，对不同剂型和不同厂家中主要成分的差异进行研究，结果表明不同剂型和不同厂家之间存在含量差异，而同一厂家的含量具有一致性。近红外光谱技术是最适于实现在线分析和实时控制的成熟技术之一，已经得到广泛应用。可避免测量过程可能带来的污染，是一种“绿色分析技术”。以近红外光谱技术为核心的中药生产过程智能化控制技术，是通过将近红外在线检测集成到中药自动化生产线的多个环节中，形成中药生产质量控制新模式。结合建立的六味地黄丸色谱分析方法，采用近红外光谱技术，将近红外在线检测集成到中药自动化生产线的多个环节中，建立根据中药内在质量进行自动控制的中药生产质量控制新模式，研究建立了六味地黄丸提取过程的近红外光谱在线分析方法，建立了六味地黄丸提取过程的4个指标成分丹皮酚、芍药苷、马钱苷和没食子酸的光谱校正模型。用此模型分析六味地黄丸提取过程，得到了比较满意的结果。研究表明，近红外光谱技术可用于六味地黄丸提取过程的在线分析及预测。六味地黄丸在临床的应用中，用于治疗的多种疾病和下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴平衡失调有关。HPG轴是神经内分泌免疫调节(NIM)网络的重要组成部分，HPG轴平衡失调是NIM网络平衡失调的重要原因之一。本研究通过建立经典的中医模型-肾阴虚模型，主要研究六味地黄丸对小鼠肾阴虚的免疫作用，六味地黄丸治疗的许多疾病和下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴平衡失调有关。研究摘除双侧卵巢后，雌性大鼠下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴各环节激素水平的变化，研究六味地黄丸不同剂型对动物内分泌的作用，结果表明不同剂型的六味地黄丸具有明显的免疫作用，但不同剂型之间不存在显著差异。化学计量学是一门应用数学、统计学和计算机技术的原理和方法来处理化学数据的学问，可以从化学量测数据中最大限度地提取有用的化学信息，其中模式识别在中药研究中被用作中药质量研究的一种重要数据分析方法。建立了多个厂家不同剂型的六味地黄丸的指纹图谱，结合主成分分析（PCA）、聚类分析（HCA）等无监督的模式识别方法对六味地黄丸进行分类研究，通过应用偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）进行不同剂型和厂家的质量评价，通过PLS-DA建立合理的模型后，发现5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、芍药苷、没食子酸等成分对蜜丸和浓缩丸的分类具有关键作用，故可用作六味地黄丸制剂的化学标记物，可作为质量控制的指标性成分和进一步研究的方向。综合色谱数据信息和药效评价信息，采用LARS（Least Angle RegressionAlgorithm）回归算法进行了谱效学的初步相关研究，对11个批次六味地黄丸指纹图谱和相关免疫药效数据进行分析评价，采用该算法在指纹谱中寻找与药效相关的成分，发现了多个具有一定价值的化学成分，本研究可为建立中药指纹图谱与药效学相关的复方中药质量控制模式提供一种方法学的研究创新。更多还原

【Abstract】 Chromatography hyphenated technology like HPLC-DAD-TOF/MS was employed toanalyze the components in the wide-used Chinese patantdrug-liuweidihuangwan(LWDHW). The databases of chemical components in the herbwere established firstly. The peaks in the chromatographic fingerprint of LWDHW wereidentified by comparing the characters and structural elucidation with HPLC-IT/MS andthe better distinct fingerprint was obtained. The HPLC method was established todeterminate the contents of5-HMF, gallic acid, loganin, sweroside, paeoniflorin andpaeonol in LWDHW.Kidney-yin-vacuity was modling to study the effect of LWDHW on the immunity forKidney-yin-vacuity rat. The diseases treated by LWDHW ralate to the dysfunction ofhypothalamus-pituitary-gonad. The changes of hormonal readiness in each units ofHypothalamus-pituitary-ovarian Axis in ovariectomized female rats are abserved toresearch the effect of LWDHW in internal secretion of animals.Near infrared spectroscopy combined the established chromatographic method wasemployed to determinate the several active components in the sections of automatic line toproduce LWDHW. The new quality control model ofChinese Materia Medica production was constructed according to the interal quality ofTCM.The chromatographic fingerprints of LWDHW with different manufactures anddifferent preparations were established. Several multivariable data analysis methods suchas PCA, HCA and PLS-DA were employed to evaluate the quality of LWDHW withdifferent manufactures and different preparations and the chemical marks was obtained tobe as the indicial compounds.Least Angle Regression Algorithm was applied to evaluate the relationship ofchromatographic fingerprints and pharmacological action of LWDHW. Combinedinformation of fingerprints and pharmacology of11batchs LWDHW were used to get theative ingridents. The established method layed the foundation of TCM quality controlrelated to pharmacology.更多还原