不同抗原表位CART-30细胞对经典型霍奇金淋巴瘤细胞株的杀伤作用及优化研究

【摘要】 背景与目的 CD30-CART细胞现已应用于复发/难治性CD30阳性的经典霍奇金淋巴瘤（classical hodgkin lymphoma,cHL）患者中并取得一定疗效，但其疗效仍待进一步提高，本研究选择不同抗原表位的两种单克隆抗体Ki-4和Ber-H2，优化性构建不同CAR基因片段载体，探讨两种CART细胞对CD30阳性的cHL细胞L428的杀伤作用及其作用机制。方法 构建携带不同抗原表位的CD30-CAR基因片段的慢病毒载体，通过流式细胞检测技术比较两种不同抗原表位CART-30细胞对cHL细胞的杀伤作用，采用蛋白质免疫印迹法（western blotting,WB）分析不同抗原表位的CART-30细胞对cHL细胞NF-κB通路的调控作用。结果 成功构建了不同抗原表位的CD30-CART细胞，平均阳性率为65.7%。Ki-4组效靶比为1∶1时，杀伤效率平均值为（35.15±4.13）%(n=6)；效靶比为10∶1时，杀伤效率的平均值为（66.99±4.36）%(n=6)。Ber-H2组效靶比为1∶1时，杀伤效率的平均值为（31.95±3.11）%(n=6)；效靶比为10∶1时，杀伤效率的平均值为（56.11±2.73）%(n=6)。CD19组效靶比为1∶1时，杀伤效率的平均值为（21.92±2.14）%(n=6)；效靶比为10∶1时，杀伤效率的平均值为（45.49±5.31）%(n=6)。CIK组效靶比为1∶1时，杀伤效率的平均值为（16.99±0.79）%(n=6)；效靶比为10∶1时，杀伤效率的平均值为（32.22±2.11）%(n=6)(P<0.001)。WB结果显示，TNF-α组及Ki-4的2h和3h组的磷酸化P65表达呈强阳性，IκBα蛋白表达呈弱阳性；而空白对照组、Ki-4的0 h组、Ber-H2各组的磷酸化P65和IκBα蛋白表达均呈弱阳性。结论 不同抗原表位的CD30-CART细胞对经典型霍奇金淋巴瘤细胞杀伤作用不同；Ki-4的单链可变区片段能有效激活NF-κB，但Ber-H2-CARs不能激活NF-κB。更多还原